进口白介素检测试剂盒公司

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被白细胞介素15（IL-15）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素15（IL-15）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48 pg/mL

试剂盒性能：

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：zui低检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

操作注意事项：

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

样品收集、处理及保存方法：

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样ben稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

ELISA实验中一般需要4次加样，即加标本、加检测抗体、加底物和加终止液。实验室使用的微量加样器应注意保样并定期校正。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致最后读书差别，因此避免仪器带来误差。加样注意事项：

1.     加样前：溶液应充分混匀。加样时避免90度向孔中滴加液体，否则会导致液体残留再吸头上，从而导致加样不准确。正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。

2.     加样时：避免速度过快，否则无法保证微量加样的准确性和均一性；避免液体溅出；

3.     加样品时：单孔用量要求：≥50微升/指标，如需要做2个复孔则血量≥100微升/指标。

4.     每次加样顺序一致，尤其底物、终止液顺序一致，保证每个孔显色时间相同。

5.     如果移液枪漏气以至于加样的量不够，不能用枪吸出再加，做相应记录实验。