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生长因子的种类众多,主要可分为血小板来源生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF-oL和TGFl3)、成纤维细胞生长因子(FGF)、类胰岛素生长因子(IGF)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素类生长因子(IL—l、IL—ll、IL一lll等)等。表皮生长因子(EGF)是一种由53个氨基酸残基组成的耐热单链低分子多肽。EGF与靶细胞上的EGF受体特异性识别结合后,发生一系列生化反应,最终可促进靶细胞的DNA合成及有丝分裂。EGF无糖基部位,非常稳定,耐热耐酸,广泛存在于体液和多种腺体中,主要由颌下腺、十二指肠合成,在人体的绝大多数体液中均已发现,在乳汁、尿液、精液中的含量特异性地增高,但在血清中的浓度较低。
检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被表皮生长因子(EGF)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法:
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品:
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
小鼠表皮生长因子(EGF)ELISA检测试剂盒组成及其配置:(标准品(S0-S5)浓度依次为:0、30、60、120、240、480 pg/mL)
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔/48孔)。
2. 标准品(Standard):0.3ml*6管
3. 样ben稀释液(Sample Diluent):1×6ml/瓶
4. 检测抗体-HRP(HRP-Conjugate reagent):1x 10ml/瓶
5. 终止液(Stop Solution):1×6ml/瓶
6. 底物溶液(Chromogen Solution):6ml*2瓶。
7. 20x浓缩洗涤液(20X WashSolution):1×25ml/瓶,
8. 说明书(User manual): 1份
9. 封板膜(Closure plate membrane):2份
10.自封袋(Sealed bags):1个
试剂盒性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 pg/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
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